아데노 바이러스를 이용한 Telomerase-Antisense 발현이 조혈모세포 체외 배양 시 분화, 증식 및 Apoptosis에 미치는 영향 = The Effect of Adenovirus-Mediated Telomerase Antisense Expression on Cellular Proliferation and Apoptosis of in-vitro Cultured Hematopoietic Stem Cells
저자
유지현 (고려대학교 의과대학 줄기세포연구소) ; 김병수 (고려대학교 의과대학 내과학교실, 줄기세포연구소) ; 오지현 (고려대학교 의과대학 줄기세포연구소) ; 송준석 (고려대학교 의과대학 생명공학연구소) ; 오상철 (고려대학교 의과대학 내과학교실) ; 서재홍 (고려대학교 의과대학 내과학교실) ; 최철원 (고려대학교 의과대학 내과학교실, 줄기세포연구소) ; 신상원 (고려대학교 의과대학 내과학교실) ; 김열홍 (고려대학교 의과대학 내과학교실) ; 김준석 (고려대학교 의과대학 내과학교실) ; 김영태 (고려대학교 의과대학 산부인과학교실, 줄기세포연구소) ; 김선행 (고려대학교 의과대학 산부인과학교실, 줄기세포연구소)
발행기관
학술지명
권호사항
발행연도
2003
작성언어
Korean
주제어
KDC
510.000
자료형태
학술저널
수록면
104-108(5쪽)
제공처
연구배경: 본 연구는 아데노 바이러스를 이용한 telomerase-antisense(TA) 발현이 조혈모세포로 체외 배양 시 분화, 증식과 apoptosis에 미치는 영향을 규명하고자 시행되었다.
방법: 7명의 정상 골수 공여자 골수혈로부터 단핵구를 분리 후 1×10^(5)/mL 농도로 통상적인 LTC-IC assay를 시행한 대조군과 TA (Adenovirus 10⁴ PFU/mL, 3 mL) 처리된 LTC-IC assay를 시행한 실험군으로 분류하여 양 군 간의 배양 2주후 배양된 세포 수 및 모양, 생존율, 그리고 histone-DNA 비율의 측정을 통하여 apoptosis 정도(ELISA법, Cell Death Detection ELISA^(PLUS), Roche, Germany)를 비고, 분석하였다.
결과: 대조군에서는 세포 수가 1.1~1.5 (중앙값: 1.2)×10⁴이었고 실험군에서는 세포 수가 2.3~3.3 (중앙값: 2.6)×10⁴로 실험군에서 유의하게 많았다. 그리고, Tryphan dye 염색후 100개의 세포를 관찰하여 염색되지 않은 세포를 생존세포로 간주하여 그 백분율을 계산한 결과 대조군은 71~83 (중앙값: 76)%, 실험군은 69~84 (중앙값: 77)%로 양 군 간에 차이가 없었다. 또한 각 군 간의 apoptosis 양상을 비교한 결과(negative control: 0.020, positive control: 0.156), 각각 대조군에서는 0.0786~0.121(중앙값: 0.0983), 실험군에서는 0.0811~0.123 (중앙값: 0.0994) 값을 보임으로써 유의한 차이가 없었다.
결론: 조혈모세포의 체외 배양 시 아데노 바이러스를 통한 telomerase-antisense 발현이 세포 사멸이나 apoptosis에 유의한 영향을 미치지 않으면서 세포 증식을 촉진시킬 가능성이 있음을 본 연구 결과 확인할 수 있었다.
Background: This study was tried to evaluate the effect of adenovirus-mediated telomerase antisense (TA) expression on cellular proliferation and apoptosis of the ex-vivo culture in hematopoietic stem cells.
Methods: We used adenovirus vector containing recombinant antisense telomerase template RNA. Mononuclear cells were obtained from 7 bone marrow donors. Each samples were divided into two groups, consisted of the study group treated with telomerase antisense oligonucleotides (TA) and control group without treatment of TA. And then, each samples were cultured in the long-term culture system (LTC-IC culture). We evaluated the cell number and apoptosis degree at 2 weeks after LTC-IC culture, and compared the viable cell number and the degree of apoptosis between control and experimental groups.
Results: Total cell number of study group (2.3~3.3 (median: 2.6)×10⁴) was significantly higher than that of control group (1.1~1.5 (median: 1.2)×10⁴). Viable cell percentage of control and study groups were 71~83 (median: 76)% and 69~84 (median: 77)%, respectively, without significant difference. And there was no difference of apoptosis degree between control and study groups (0.0786~0.121 (median: 0.0983) vs 0.0811~0.123 (median: 0.0994),
Conclusion: We found the phenomenon that adenovirus- mediated antisense expression of telomerase RNA might accelerate the proliferation of hematopoietic stem cells without significant effect on the apoptosis degree. Further studies will be warranted to confirm this results and verify the mechanism of these phenomena.
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