SCOPUS
KCI등재
임신부 뇨로부터 정제된 인간 상피세포 증식 인자 유사체의 in vitro bioassay 및 특성 = In vitro Bioassay and Characterization of Human Epidermal Growth factor Derivatives from Pregnant Human Urine
저자
박세철 ((주)유한양행 중앙연구소) ; 전재현 ((주)유한양행 중앙연구소) ; 남정현 ((주)유한양행 중앙연구소) ; 권태종 (건국대학교 미생물공학과) ; 고인영 ((주)유한양행 중앙연구소) ; 유광현 ((주)유한양행 중앙연구소)
발행기관
한국미생물생명공학회 ( 구 한국산업미생물학회 )(The Korean Society for Applied Microbiology)
학술지명
한국미생물·생명공학회지 (Korean Journal of Microbiology and Biotechnology)
권호사항
발행연도
1996
작성언어
Korean
주제어
KDC
570.6
등재정보
SCOPUS,KCI등재
자료형태
학술저널
발행기관 URL
수록면
472-477(6쪽)
제공처
소장기관
벤조산흡착, 음이온 교환수지, 단일클론항체을 이용한 immunoaffinity chromatography를 통하여 임신부 뇨로부터 천연의 hEGF를 정제하였다. 정제된 hEGF는 μ Bonda C_18 column을 사용한 HPLC 분석을 통하여 4개의 fraction으로 분리가 가능하였으며 western blot과 double immunodiffusion 실험 결과, 각각의 fraction이 hEGF의 특성을 가진 유사체인 것을 알 수 있었다. 또한 hEGF 표준 물질과의 spiking 및 아미노산 분석 등을 통하여 두 번째 fraction이 nhEGF와 동일한 것으로 확인하였다. nhEGF 및 그 유사체의 생물학적 활성 비교를 위하여 NIH 3T3 세포주에서 5'-Brdu incorporation 측정을 위한 labelling 시간, 혈청 농도의 최적 조건을 결정하였다. NIH 3T3 세포주의 DNA 합성능은 0.2% FCS가 포함된 저혈청 배지에서 hEGF가 0.1~10 ng/ml 농도로 첨가하였을 때 증가하는 경향을 나타냈다. HPLC를 통하여 분리된 두번째 hEGF 유사체가 다른 유사체보다도 생물학적인 활성이 우수하였으며, rhEGF 표준물질과의 spiking 및 아미노산 서열 분석등을 통하여 nhEGF로 밝혀졌다. 임신부의 뇨의 hEGF 유사체 함량중 natural hEGF는 46%이었다.
Natural human epidermal growth facto (nhEGF) was purified from pregnant human urine by benzoic acid adsorption, DEAE-Sepharose ion exchange, and immunoaffinity chromatography. The purified nhEGF was further separated into four fractions using Bondapak C_18 HPLC system. Following characterization by Western blot and double immunodiffusion, we found that each fraction corresponds to four derivatives of the nhEGF. For biological analysis of nhEGF, we optimized the labeling time and serum concentration for the incorporation of 5-bromo-2'-deoxy-uridine (BrdU), a non-radioactive alternative for [^3H]-thymidine uptake, into NIH 3T3 cells. The DNA synthesis of NIH 3T3 cells was gradually increased at the nhEGF concentrations between 0.1~10 ng/ml in the Dulbecco's Modified Eagles Medium (DMEM) containing 0.2% Fetal calf serum (FCS). When we assayed the biological activity of four fractions, the activity of the second fraction was superior to that of the others.
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