KCI등재
SCOPUS
Vero 세포 공배양이 동결보존 후 해빙한 ICR계 생쥐 2-세포기 배아 발생율에 미치는 영향 = Effects of Coculture of Vero Cells on the Development of Frozen-thawed Two-cell Stage ICR Mouse Embryos
저자
장두영 (인제대학교 의과대학 서울백병원 산부인과학교실) ; 고희은 (인제대학교 의과대학 서울백병원 산부인과학교실) ; 이일한 (인제대학교 의과대학 서울백병원 산부인과학교실) ; 정경남 (인제대학교 의과대학 서울백병원 체외수정연구실) ; 고승희 (인제대학교 의과대학 서울백병원 산부인과학교실) ; 고재환 (인제대학교 의과대학 서울백병원 산부인과학교실) ; 김용봉 (인제대학교 의과대학 서울백병원 산부인과학교실)
발행기관
학술지명
Obstetrics & Gynecology Science(Obstetrics & Gynecology Science)
권호사항
발행연도
2002
작성언어
Korean
주제어
KDC
516
등재정보
KCI등재,SCOPUS,ESCI
자료형태
학술저널
발행기관 URL
수록면
651-658(8쪽)
제공처
목적 : 동결보존 후 해빙할 경우 대부분의 포유류 배아에서 생존율이나 양질 배아의 회수율 및 임신율 등이 동결하지 않은 신선배아에 비해 현저하게 낮다. 본 실험에서는 Vero 세포 공배양이 동결보존후 해빙한 ICR계 생쥐 2-세포기 배아 발생에 유익한 영향을 미치는지 여부를 알아보고자 한다.
재료 및 방법 : 5-6 주령의 ICR 계 암컷 생쥐로부터 후기 2-세포기 배아를 얻어 1.5M 1,2-propanediol과 0.1M sucrose를 혼합한 동결보존액에서 동결시킨 다음 4단계 해빙방법을 거쳐 해빙한 후 2-세포기 배아만을 회수하여 실험재료로 사용하였다. 대조군으로서 Ham's F-10와 10% FBS을 섞은 배양액과 실험군으로서 Vero 세포가 단층으로 깔린 기본 배양액에 각각 배양하여 부화가 이루어질 때까지 배아 발달과정을 24시간 간격으로 5일 동안 관찰하였다.
결과 : 총 473개의 2-세포기 배아를 동결시켰으며 해빙 후 467개 (98.7%)의 2-세포기 배아를 회수하였다. 그중 2개의 할구 모두 건강한 배아가 299개 (64.0%), 1개의 할구가 변성된 것이 83개 (17.8%)였다. 2개의 할구 모두 건강한 299개 중 290개의 2-세포기 배아를 실험에 사용하였다. 배양 시작 24시간 후 4-세포기 이상의 배아 발생률은 대조군 (61.3%)과 실험군 (69.3%)간에 유의한 차이가 없었다 (p=0.161). 그러나 96시간, 120시간 이후 에는 대조군에 비해 Vero 세포 공배양군인 실험군에서 유의하게 높은 발생률을 보였다 (각각 14.4% 대 30.7%, (p=0.002); 9.0% 대 24.0%, (p=0.001)).
결론 : 동결보존된 2-세포기 생쥐 배아를 해빙 후 Vero 세포와 공배양할 경우 공배양이 동결과정이 해빙 후 미칠 수 있는 배아 발달의 저해효과를 제거하는 것으로 보이며, 이러한 효과는 배아 발달 과정 중 초기보다 후기에 더욱 현저한 것으로 보인다. 공배양의 이러한 이로운 효과는 동결보존된 배아를 체외배양시 임상의가 이식할 수 있는 적절한 시기에 양질의 배아를 얻을 수 있는 유용한 도구로 이용할 수 있다고 생각하며, 이로써 동결보존법의 단점인 낮은 임신율을 보다 향상시킬 수 있을 것으로 기대한다.
Objective : The rate of developmental progression of frozen-thawed embryos is lower than that of nonfrozen embryos in mice, cows, humans and other mammalians. This study was designed and performed to evaluate the beneficial effects of coculture of Vero cells on the development of frozen-thawed two-cell stage embryos of ICR strain mice.
Materials and Methods : The late two-cell stage mouse embryos were obtained from oviducts of 5∼6 week old mated ICR mice superovulated with pregnant mare's serum gonadotropin (PMSG) and human chorionic gonadotropin (hCG). Two-cell stage mouse embryos were frozen slowly with 1,2-propanediol and sucrose as cryoprotectants and thawed rapidly, followed by stepwise dilution. The frozen-thawed embryos were cultured in Ham's F-10+10% Fetal Bovine Serum (FBS) basal culture medium with and without Vero cells. The rates of development in both groups were compared every 24 hours for 5 days.
Results : Vero cells did not significantly stimulate the rate of embryonal development compared to controls at 24 hours after culture, 124 (69.3%) and 68 (61.3%), respectively (p=0.161). On day 4, however, 55 (30.7%) cocultured embryos had developed to expanded-hatching blastocysts, which was the significantly higher number than that of the embryos in controls: 16 (14.4%) (p=0.002). In addition, more embryos in coculture developed to hatching-hatched blastocysts (43[24.0%]) compared to the controls (10[9.0%]) (p=0.001).
Conclusion : Coculture of cryopreserved embryos after thawing with Vero cells seems to be an useful tool to remove the postthaw deleterious effects of freezing and to obtain better quality embryos appropriate for transfer. These beneficial effects of Vero cell coculture appear to become more prominent as the embryonic development progresses over time.
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